Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
В отсутствии других физико-химических факторов измеренная оптическая плотность (А) пропорциональна длине пути (b), через который проходит излучение, и концентрации (с) вещества в растворе в соответствии с уравнением:
A = e • c • b,
где:
e - молярный показатель (коэффициент) погашения;
b - концентрация вещества в растворе, в молях на литр;
с - длина оптического пути, в сантиметрах.
Величина А1% представляет собой удельный показатель поглощения, то есть оптическую плотность раствора вещества с концентрацией 10 г/л в кювете с толщиной слоя 1 см, то есть:
А1% =
1 см -if
М .м.
Если нет других указаний в частной статье, измерение оптической плотности проводят при указанной длине волны с использованием кюветы 1 см и при температуре (20+1)оС. Если нет других указаний в частной статье, измерение проводят по сравнению с тем же растворителем или той же смесью растворителей, в которой растворено вещество. Оптическая плотность растворителя, измеренная против воздуха при указанной длине волны, не должна превышать 0,4 и желательно, чтобы она была меньше 0,2. Спектр поглощения представляют таким образом, чтобы оптическая плотность или ее некоторая функция были приведены по оси ординат, а длина волны или некоторая функция от длины волны - по оси абсцисс.
Если в частной статье приводят только одно значение для положения максимума поглощения, то это означает, что полученное значение максимума не должно отличаться от указанного более чем на +2 нм.
Прибор. Спектрофотометр, предназначенный для измерений в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, состоит из оптической системы, выделяющей монохроматическое излучение в области от 200 нм до 800 нм, и устройства для измерения оптической плотности.
Проверка шкалы длин волн. Для проверки шкалы длин волн используют линии водородной или дейтериевой разрядной лампы или линии паров ртути, а также максимумы поглощения раствора гольмия перхлората Р, которые представлены в Табл. 2.2.25.-1. Допустимое отклонение составляет +1 нм для ультрафиолетового и +3 нм для видимого диапазонов.
Таблица 2.2.25.-1.
241,15 нм (Но) 404,66 нм (Hg)
253,7 нм (Hg) 435,83 нм (Hg)
287,15 нм (Но) 486,0 нм (йв)
302,25 нм (Hg) 486,1 нм (Нв)
313,16 нм (Hg) 536,3 нм (Но)
334,15 нм (Hg) 546,07 нм (Hg)
361,5 нм (Но) 576,96 нм (Hg)
365,48 нм (Hg) 579,07 нм (Hg)
Проверка шкалы оптической плотности. Проверяют значения оптических плотностей, используя раствор калия дихромата Р при длинах волн, указанных в Табл. 2.2.25.-2. В таблице 2.2.25.-2 приведены точные значения удельного показателя погашения и его допустимые пределы для каждой длины волны.
Для проверки шкалы оптических плотностей используют раствор калия дихромата, приготовленный следующим образом. От 57,0 мг до 63,0 мг (точную навеску) калия дихроомата Р, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 130оС, растворяют в 0,005 М растворе кислоты серной и доводят до 1000,0 мл этим же растворителем.
Таблица 2.2.25.-2.
Длина волны, Удельный показатель Допустимые пределы
в нанометрах поглощения Д1%1см Л1%1см
235 124,5 от 122,9 до 126,2
257 144,5 от 142,8 до 146,2
313 48,6 от 47,0 до 50,3
350 107,3 от 105,6 до 109,0
Предельный уровень рассеянного света. Рассеянный свет может быть определен при данной длине волны с использованием соответствующих фильтров или растворов: например, оптическая плотность раствора 12 г/л калия хлорида Р в кювете с толщиной слоя 1 см при 200 нм, при использовании воды Р в качестве компенсационного раствора, должна быть больше 2.
Разрешающая способность (для качественного анализа). Если указано в частных статьях, то определяют разрешающую способность спектрофотометра следующим образом. Записывают спектр 0,02% (об/об) раствора толуола Р в гексане Р. Минимально допустимое значение отношения оптической плотности в максимуме поглощения при 269 нм к оптической плотности в минимуме поглощения при 266 нм указывают в частной статье.
Ширина спекральной щели (для количественного анализа). В случае использования спектрофотометра с изменяемой шириной спектральной щели при выбранной длине волны возможны погрешности, связанные с шириной этой щели. Для их исключения ширина спектральной щели должна быть малой по сравнению с полушириной полосы поглощения и в то же время должна быть максимально велика для получения высокого уровня I0. Таким образом, ширина щели должна быть такой, чтобы дальнейшее ее уменьшение не изменяло величину измеряемой оптической плотности.
Кюветы. Допустимые вариации в толщине слоя используемых кювет должны быть не более +0,005 см. Кюветы, предназначенные для испытуемого и
